Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1改型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出新现肾脏自身免疫球蛋白到再次出新现1改型冠心病针灸病征的方面率在儿童时期就有较好的描绘出新，多个肾脏自身免疫球蛋白非典型的儿童里面有70%在血清转换后10年内患上冠心病，而随访15年的儿童这一比例降低到84%。比起之下，占针灸1改型冠心病一半以上的改型1改型冠心病的中风机制还没有人给予充分的研究者。

越来越多的人开始运用于分期系统来定义1改型冠心病的方面：幼纤在再次出新现多种肾脏自身免疫球蛋白时进入第1下一阶段，再次出新现摄入量所致时进入第2下一阶段，再次出新现病征时进入第3下一阶段。一些多发肾脏自身免疫球蛋白非典型的幼纤，在1期和2期，方面较比较慢，并演进为中风的1改型冠心病。我们前描绘出新了一小组在首次测定到多种肾脏自身免疫球蛋白抽取后据估计10年无冠心病的近于比较慢方面者，这小组病患人数近于少，但外观上非常明确。随后，我们找到肾脏自身抗原特异性CD8+T细胞核质子化在方面减比较慢的病患里面基本不普遍存在，但在早先中风和仍然普遍存在的冠心病病患里面很容易测定到。这或许表明，与方面病患比起，这些病患自身免疫质子化的调节增强。

现代研究者表明，尽管调节性T细胞核(Treg)总数正常，但冠心病病患普遍存在一些动态缺陷，其里面包括对IL-2的质子化能力降低。此外，冠心病病患里面的现象CD4+T细胞核或许对调节不够具抵抗性，观感为现象T细胞核的选择性逼近，自然产生的Treg和纤外产生的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞核里面IL-2质子化逼近。本研究者的目的是描绘出新了CD4+调节性T细胞核(Treg)在群集近于减比较慢方面者里面的外观上，他们的平均年龄组为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

原理：BOX研究者是一项以这群人为基础的纵向研究者，在21岁以下复发的病患亲属里面核质子化查1改型冠心病的危险因素。我们前描绘出新了仍然减比较慢方面者的外观上，他们保持多重肾脏自身免疫球蛋白非典型超过10年，但没有人再次出新现冠心病的针灸病征，比较慢性或非顺利变性自身免疫。随后，10名继续保持无冠心病并愿意发放大量血液抽取的减比较慢方面者纳入T和B细胞核动态系统性。在目前的研究者里面，8名比较慢方面者(SP小组)，里面位年龄组43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的肾脏自身免疫球蛋白非典型。所有的参与者都保持稳定1改型冠心病方面的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身免疫球蛋白对某些抗原的非典型质子化，然而，一名病患已经保持稳定2期据估计6年，但没有人再次出新现针灸病征，一名病患被诊断为冠心病，该受试者72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在科研人员里面对该供纤顺利进行了单独检验。剥离外周血单个核质子化细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核术和T细胞核选择性试验检验供纤里面Treg的阈值、表改型和动态。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)顺利进行无监督聚类系统性，检验Treg表改型。

结果：与有益供纤比起，来自比较慢方面纤的知觉CD4+T细胞核的监督聚类揭示，激活的知觉CD4+ Treg阈值降低，与止痛药诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表达出新来降低有关。一名HbA1c消退的病患与方面减比较慢者和意味着的对照小组比起，Treg谱不尽相同。动态系统性表明，与有益供纤比起，来自减比较慢方面纤的Treg介导的CD4+现象T细胞核选择性显着受损。观感为对现象CD4+T细胞核CD25和CD134表达出新来的选择性降低。

左图1 深入的表改型系统性揭示，CD4+Treg亚改型在比较慢方面队列里面降低。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有供纤的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据记号物表达出新来解剖出新10个元簇:知觉T细胞核_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞核;HLA-DR + GITR +知觉T细胞核;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)运用于9个不同Treg记号分解成的10个元簇的MST。每个路由器亦然一个空降兵(100个空降兵)，不够大的元空降兵(10个元空降兵)在路由器小组周围上色。每个路由器里面的饼左图说明单个记号的表达出新来级别。(b)每个元聚类的热左图，以揭示既有记号表达出新来。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)分解成左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较丰度为每个metacluster装线或左图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP小组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞核(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞核(l)。浅蓝色圆圈亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 运用于CITRUS的预测模改型得出结论，Treg阈值的降低是方面减比较慢的标志。分级门控(a - f)和柑橘系统性(g-k)比较SP参与者和意味着的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差别。(a)表改型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的亦然性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出新来顺利进行剥离，三维FlowSOM社会性。(b) HD(小点)和SP(蓝点)小组以及供纤SP 606(浅蓝色)里面CD25+ cd127的阈值简介左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控可数的装线或左图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出新来强度着色，记号突出新的簇被识别为SP和HD队列相互间的不同。(j)装线或左图揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)小组里面，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的比较丰度(比例)。(k)加权揭示每个簇的表改型(白色)和Treg记号比较表达出新来与历史背景表达出新来(白色);上列，内核Treg_3;请注意一行，内核Treg_4。历史背景与所有其他簇里面记号的表达出新来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

左图3 与有益献血者比起，方面减比较慢者知觉treg的GITR降低。每个知觉CD4+T细胞核元簇(知觉T细胞核_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞核;HLA-DR + GITR +知觉T细胞核;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个表达出新来记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表达出新来热左图(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR表达出新来串联，揭示加权(c)和简介左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有供纤包括，p< 0.05(白色)供纤SP 606和意味着的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR表达出新来，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(浅蓝色)串联，揭示加权(e)和简介左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

左图4 来自减比较慢方面的CD4+ treg细胞核掌控现象CD4+T细胞核的能力降低。SP小组用白色的线或和圆圈说明，HD小组用白色的线或和圆圈说明，浅蓝色的线或/圆圈说明供纤sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被记号为CFSE, Treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞核，养成3天内顺利进行流式细胞核术测定。(a-d)与CD4+此番者比较应的treg养成(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者养成。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE选择性比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性比率。运用于非典型对照(激活的响应细胞核分别为treg)数值选择性比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 现象CD4+T细胞核对减比较慢方面的T细胞核再造的选择性不够敏感。SP小组用白色的线或和圆圈说明，HD小组用白色的线或和圆圈说明，浅蓝色的线或/圆圈说明供纤sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel记号，treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞核，养成3天内顺利进行流式细胞核术(CD25反染)和细胞核因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606此番者主导养成。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE选择性百分率(b)。(c,d) CD25选择性百分率(c)和CD134选择性百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在大一里面的表达出新来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出新的结论是，来自减比较慢方面子的再造知觉CD4+Treg在GITR表达出新来里面给予了拓展和多样化，凸显了进一步研究者Treg在1改型冠心病风险幼纤里面的异质性的前提。

原文出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28