Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐适配

从第一次注意到口内自身抗原到注意到1型号白血病临床病征的成果率在成人初就有较好的描绘，多个口内自身抗原感染性的成人里有70%在血浆转换后10短期内身患白血病，而随访15年的成人这一人口比例缩减到84%。相比之下之下，占去临床1型号白血病一半以上的型号1型号白血病的发病的系统还没有得不到充分的研究工作。

越来越多的人开始用到分期系统来假设1型号白血病的成果：群微在注意到多种口内自身抗原时离开第1之前，注意到血糖异常时离开第2之前，注意到病征时离开第3之前。一些多发口内自身抗原感染性的群微，在1期和2期，成果较快，并演进为发病的1型号白血病。我们之前描绘了一第都由在首次验证到多种口内自身抗原取样后有数10年无白血病的极快成果者，这第都由病症人数少，但不同之处颇为明确。随后，我们挖掘出口内自身淋巴细胞会选择性CD8+T细胞会自由基在成果平稳的病症里基本不存在，但在近期发病和值得注意的白血病病症里很非常容易验证到。这可能表明，与成果病症相比之下，这些病症免疫自由基的通气增强。

早期研究工作表明，尽管通气性T细胞会(Treg)数量但会，但白血病病症存在一些基本功能缺陷，其里还包括对IL-2的自由基潜能降低。此外，白血病病症里的效可不CD4+T细胞会可能对通气不够具抵抗性，展示出为效可不T细胞会的抑制作用减弱，自然归因于的Treg和微外归因于的其会Treg，以及淋巴细胞会经历的CD4+T细胞会里IL-2自由基减弱。本研究工作的旨在是描绘了CD4+通气性T细胞会(Treg)在一小群极平稳成果者里的不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

工具：BOX研究工作是一项以人群为基础的中轴研究工作，在21岁一般而言确诊的病症亲人里检查1型号白血病的危险诱因。我们之前描绘了长期平稳成果者的不同之处，他们保持多重口内自身抗原感染性有数10年，但没有注意到白血病的临床病征，快性或非同步外阴免疫。随后，10名独自保持无白血病并愿意还包括大量血液取样的平稳成果者纳入T和B细胞会基本功能比对。在目前的研究工作里，8名快成果者(SP第都由)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的口内自身抗原感染性。所有的举例来说都东南面1型号白血病成果的1期，尽管一些人随后失去了口内自身抗原对某些淋巴细胞会的感染性自由基，然而，一名病症已经东南面2期有数6年，但没有注意到临床病征，一名病症被诊断为白血病，该病人72岁，在采集科学实验取样时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据处理里对该NADPH同步进行了另行检测。裂解外周血单个核能细胞会(PBMCs)，用到多比如说流式细胞会术和T细胞会抑制作用试验检测NADPH里Treg的频率、基因型号和基本功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类侧重研究工作、并不一定和重返)同步进行无监督聚类比对，检测Treg基因型号。

结果：与心理健康NADPH相比之下，来自快成果微的遗忘CD4+T细胞会的监督聚类揭示，启动时的遗忘CD4+ Treg频率缩减，与糖皮质激素其会的TNFR之外蛋白(GITR)理解缩减有关。一名HbA1c升温的病症与成果平稳者和比如说的对照第都由相比之下，Treg谱有所各有不同。基本功能比对表明，与心理健康NADPH相比之下，来自平稳成果微的Treg介导的CD4+效可不T细胞会抑制作用明显受损。展示出为对效可不CD4+T细胞会CD25和CD134理解的抑制作用缩减。

三幅1 侧重的基因型号比对揭示，CD4+Treg亚型号在快成果队列里缩减。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有NADPH的来时CD4+CD45RA -细胞会上。根据标示物理解侧重研究工作出10个元簇:遗忘T细胞会_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞会;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞会;线或程Treg_1;线或程Treg_2;线或程Treg_3;和线或程Treg_4。(a)用到9个各有不同Treg标示生成的10个元簇的MST。每个键值代表者一个战略性(100个战略性)，不够大的元战略性(10个元战略性)在键值第都由周围上色。每个键值里的饼三幅暗示单个标示的理解层级。(b)每个元聚类的热三幅，以揭示整微标示理解。(c, d)为HD第都由(c)和SP第都由(d)生成三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下丰度为每个metacluster箱子示意三幅(丰度> 0.05%)确定为HD和SP第都由:线或程Treg_2 (e),线或程Treg_3 (f),线或程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞会(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞会(l)。黄色圆圈代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检测。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用到CITRUS的预测证实，Treg频率的缩减是成果平稳的标志。分级奈斯(a - f)和水果比对(g-k)比较SP举例来说和比如说的HD举例来说在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)性状CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的代表者性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR理解同步进行裂解，模拟FlowSOM群微。(b) HD(黑点)和SP(白点)第都由以及NADPHSP 606(黄色)里CD25+ cd127的频率汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯偏序的箱子示意三幅;(c) HLA-DRloGITR−(线或程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线或程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线或程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线或程T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度填充，箭头突出的簇被识别为SP和HD队列错综复杂的各有不同。(j)箱子示意三幅揭示了在SP(白点)和HD(灰点)第都由里，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相比之下丰度(人口比例)。(k)控制点揭示每个簇的基因型号(粉红色)和Treg标示相比之下理解与背景理解(金色);上列，线或程Treg_3;示例一行，线或程Treg_4。背景与所有其他簇里标示的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检测

三幅3 与心理健康献血者相比之下，成果平稳者遗忘treg的GITR缩减。每个遗忘CD4+T细胞会元簇(遗忘T细胞会_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞会;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞会;线或程Treg_2;线或程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个理解标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热三幅(sp606不还包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇里所有HD(黄色)、所有SP(金色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR理解串联，揭示控制点(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon选取符号秩和检测，p< 0.07(黄色)所有NADPH还包括，p< 0.05(金色)NADPHSP 606和比如说的HD不还包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR理解，从分级奈斯，从所有HD(黄色)、所有SP(金色)和SP 606(黄色)串联，揭示控制点(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取符号秩检测

三幅4 来自平稳成果的CD4+ treg细胞会控制效可不CD4+T细胞会的潜能降低。SP第都由用金色的线或和圆圈暗示，HD第都由用黄色的线或和圆圈暗示，黄色的线或/圆圈暗示NADPHsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会同步进行分选。CD4+CD25−(可不答者)被标示为CFSE, Treg按辨别的人口比例溶液。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞会，培养3同一天同步进行流式细胞会术验证。(a-d)与CD4+可不答者相比之下可不的treg培养(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD可不答者培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用多于。用到感染性对照(启动时的响可不细胞会都有treg)计算抑制作用多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 效可不CD4+T细胞会对平稳成果的T细胞会酪氨酸的抑制作用不够敏感。SP第都由用金色的线或和圆圈暗示，HD第都由用黄色的线或和圆圈暗示，黄色的线或/圆圈暗示NADPHsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会同步进行分选。CD4+CD25−(可不答者)被cfsel标示，treg按辨别的人口比例溶液。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞会，培养3同一天同步进行流式细胞会术(CD25反染)和细胞会因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606可不答者共同培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用次之(b)。(c,d) CD25抑制作用次之(c)和CD134抑制作用次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在研究生院里的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们推论的结论是，来自平稳成果子的酪氨酸遗忘CD4+Treg在GITR理解里得不到了构建和丰富，合理化了进一步研究工作Treg在1型号白血病风险群微里的互补的必要性。

原文中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28